當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)有色溶液時(shí)，由于溶液對(duì)光的吸收作用，光的強(qiáng)度就要減弱。溶液的濃度愈大，光透過(guò)的液層愈厚，入射光愈強(qiáng)，則光被吸收得愈多，光強(qiáng)度的減弱也就愈顯著。

　　假設(shè)有入射光的強(qiáng)度為I0的單色光，通過(guò)濃度為c的有色溶液，液層厚度為l，透過(guò)光的強(qiáng)度為It，光的吸收程度與溶液的濃度、液層的厚度有關(guān)。當(dāng)入射光強(qiáng)度和液層厚度一定時(shí)，溶液的吸光度A與溶液的濃度C成正比。

　　上式為光的吸收定律的數(shù)字表達(dá)式，稱為朗伯—比耳定律。

　　該定律說(shuō)明：當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)均勻溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。光的吸收定律不僅適用于可見光，也適用于紅外光和紫外光，是吸收光度法定量分析的依據(jù)。

　　物質(zhì)對(duì)一定波長(zhǎng)的入射光的吸收能力越強(qiáng)，測(cè)定靈敏度越高。為了提高測(cè)定的靈敏度，對(duì)不同的顯色集合在不同的顯色反應(yīng)中，必須選擇具有最大吸收波長(zhǎng)的光作為入射光。

　　在比色與分光光度的計(jì)量中，有時(shí)也用透光度T表示物質(zhì)對(duì)光的吸收程度和進(jìn)行有光計(jì)算。透光度定義為透過(guò)光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度I0之比，即：T=I0/It

　　顯然T與吸光度A的關(guān)系為：A=lg(1/T)=-lgT

　　透光度通常用百分?jǐn)?shù)表示，即光透過(guò)的百分?jǐn)?shù)。例如T=100%時(shí)，A=0;T=10%時(shí)，A=1.0。

　　綜上所述，比色及分光光度法基本原理概括為兩點(diǎn)：一是基于物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收;二是吸收程度的大小符合朗伯—比耳定律。前者為選擇波長(zhǎng)的依據(jù)，后者為定量測(cè)定的基礎(chǔ)。