1、目視比色法
目視比色法是用眼睛觀察比較待測(cè)溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色深淺的比色方法。將標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液在完全相同的條件下顯色,若液層厚度相同,顏色的深淺一樣時(shí),兩者的濃度必相等,這樣由標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度可知待測(cè)溶液的濃度。
目視比色法中,最常用的是標(biāo)準(zhǔn)系列法。在進(jìn)行比色測(cè)定時(shí),首先將一系列不同量的標(biāo)準(zhǔn)溶液依次置于一組比色管中,在實(shí)驗(yàn)條件相同情況下,加入等量的顯色劑和其他試劑,稀釋至刻度,配成一套顏色由淺至深的標(biāo)準(zhǔn)色列。然后將一定量的待測(cè)試液至于另一比色管中,在相同條件下顯色,稀釋至同一刻度。從管口垂直向下看,并與標(biāo)準(zhǔn)色列進(jìn)行深淺比較。如果試液的顏色與標(biāo)準(zhǔn)色列中某一比色管的顏色深淺相同,則表示兩者濃度相同;若被測(cè)試液介于兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試液之間,則被測(cè)試液濃度必定介于這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試液之間,可取其平均值。
標(biāo)準(zhǔn)系列法的優(yōu)點(diǎn)是儀器簡(jiǎn)單,操作簡(jiǎn)便,只要配好標(biāo)準(zhǔn)色列比色就可進(jìn)行,適用于大批試樣分析;由于比色管液層較厚,使觀察顏色的靈敏度較高,適宜于稀溶液中微量組分的測(cè)定;可在復(fù)合光下測(cè)定。缺點(diǎn)是目視比色法準(zhǔn)確度較差,一般相對(duì)誤差為5%-20%;標(biāo)準(zhǔn)色列配制比較費(fèi)時(shí),且有色物質(zhì)常常不太穩(wěn)定,不能久存,標(biāo)準(zhǔn)色列需要經(jīng)常重配。雖然也可以用比較穩(wěn)定的有色物質(zhì)配制永久性的標(biāo)準(zhǔn)色列,但要經(jīng)過(guò)校正后才能使用,比較費(fèi)事。
2、光電比色法
用光電比色計(jì)測(cè)定溶液的吸光度進(jìn)行定量分析的方法稱為光電比色法。用儀器進(jìn)行測(cè)量,可以消除人的主觀誤差,提高測(cè)量準(zhǔn)確度。由光源發(fā)出的白光,經(jīng)過(guò)濾光片,得到一定波長(zhǎng)寬度的近似單色光,讓單色光通過(guò)有色溶液,透過(guò)光射到光電池上,產(chǎn)生光電流,其大小與透過(guò)光的強(qiáng)度成正比。光電流的大小以靈敏檢流計(jì)測(cè)量,在檢流計(jì)上讀出相應(yīng)的透光率或吸光度。透過(guò)光強(qiáng)度愈弱,光電流愈小,其吸光度值則愈大。
進(jìn)行光電比色測(cè)定時(shí),測(cè)定大批試樣常采用工作曲線法,也稱標(biāo)準(zhǔn)曲線法。工作曲線法是配置一系列標(biāo)準(zhǔn)比色液,在一定波長(zhǎng)下分別測(cè)其吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo),以濃度為橫坐標(biāo),得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線,稱為工作曲線或標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后在同一條件下,測(cè)量被測(cè)試液的吸光度,在工作曲線上即可查得試液的濃度。(如圖6.12)

與目視比色法比,光電比色法的優(yōu)點(diǎn)是:用光電池代替了人的眼睛進(jìn)行測(cè)量提高了精確度;當(dāng)待測(cè)溶液中有多種有色物質(zhì)共存時(shí),可選用適當(dāng)?shù)臑V光片或適當(dāng)?shù)膮⒈热芤簛?lái)消除干擾,因而提高了選擇性;由于使用了工作曲線,分析大批試樣時(shí)快速、簡(jiǎn)便。