1、測量儀器 常用檢流計或電位計。
目前使用較普遍的分光光度計為72型、721型和751型以及7230型。
721型分光光度計波長范圍360-800nm。其光學(xué)系統(tǒng)如圖6.13所示。
由光源發(fā)出的可見光射到聚光透鏡上,經(jīng)平面鏡轉(zhuǎn)角90°,通過入射狹縫到準(zhǔn)直鏡。準(zhǔn)直鏡是一塊圓形凹面反射鏡,光線在準(zhǔn)直鏡上反射后,就以一束平行光射向棱鏡,棱鏡的背面鍍鉛,經(jīng)棱鏡色散后的光在鋁面上反射再回到準(zhǔn)直鏡,再經(jīng)準(zhǔn)直鏡反射后聚在出口狹縫上,在出光狹縫后得到一定波長的單色光。單色光通過液槽和光量調(diào)節(jié)器,射到真空光電管上轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?,?jīng)放大器放大后,在檢流計上直接讀出吸光度百分透光度。
751型分光光度計波長范圍200-1000nm,即從紫外區(qū)到近紅外區(qū)。其光學(xué)系統(tǒng)如圖6.14。此儀器有氫燈和鎢絲燈兩種光源。在波長200-320nm范圍內(nèi)用氫燈;在波長320-1000nm范圍內(nèi)用鎢絲燈。以石英棱鏡作為單色器。用光電管作接受元件,配有紫敏光電管和紅敏光電管兩種。前者適用于波長200-625nm范圍,后者適用于625-1000nm范圍。此儀器配有玻璃和石英兩種液槽,分別適用于可見光區(qū)和紫外光區(qū)。
2、定量方法
主要應(yīng)用工作曲線法(標(biāo)準(zhǔn)曲線法)作分光光度法的定量方法、根據(jù)物質(zhì)對光選擇吸收的性質(zhì),先測出該物質(zhì)的吸收曲線,以求得合適的入射光波長λ。然后,根據(jù)朗伯-比爾定律,以溶液濃度與吸光度的直線關(guān)系作工作曲線。為此,用已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)系列,其濃度依次為c1,c2,c3,c4…,由小到大。在λ波長照射下,測得相應(yīng)的吸光度A1,A2,A3,A4…,以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),作出工作曲線。最后將待測溶液在λ波長下測出吸光度Ax,在工作曲線上查出cx。