(1)、無(wú)菌水的制備
在小號(hào)試管內(nèi)盛9mL自來(lái)水,塞好硅膠塞,包扎以后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后備用。無(wú)菌水常用于稀釋水樣。
(2)、滅菌
1)、干燥滅菌(熱空氣滅菌法)
①將包裝好的待滅菌物品(培養(yǎng)皿、移液管等)放入干燥箱內(nèi)。不要擺得太擠。
?、陉P(guān)箱門(mén),插上電源,啟動(dòng)開(kāi)關(guān),旋動(dòng)恒熱調(diào)節(jié)器至160℃。
?、?60℃恒溫2h(由恒熱調(diào)節(jié)器自動(dòng)控制)。注意不超過(guò)170℃,以免包裝紙被烤焦。
?、?h后切斷電源,待溫度降至70℃以下,才能開(kāi)箱門(mén)取出滅菌物品。
2)、高壓蒸汽滅菌法
?、俅蜷_(kāi)滅菌鍋蓋,向鍋內(nèi)加入適量的水,或從加水口處加水。
?、趯⒋郎缇呐囵B(yǎng)基和自來(lái)水放入鍋內(nèi),不要太擠或緊靠鍋壁,以免影響蒸汽的流通和冷凝水順壁流入物品中,加蓋旋緊螺旋,密閉。
?、鄞蜷_(kāi)排氣閥,加熱,自開(kāi)始產(chǎn)生蒸汽后約10min再關(guān)緊排氣閥,此時(shí)蒸汽已將鍋內(nèi)的冷空氣由排氣孔排盡。若鍋內(nèi)冷空氣未排盡,則達(dá)不到應(yīng)有的溫度,結(jié)果造成滅菌不徹底。
④待壓力逐漸上升到所需壓力時(shí),開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間,并控制熱源,維持所需壓力,以98.1kPa的壓力、溫度121℃滅菌15min。
?、轀缇鷷r(shí)間到達(dá)后,停止加熱。
⑥待壓力表指針降到“0”時(shí),打開(kāi)排氣閥。注意切勿過(guò)早打開(kāi),否則可因驟然減壓降溫造成滅菌液體外溢和玻璃破碎。
?、叽艢饪谉o(wú)蒸汽排出,方可開(kāi)鍋蓋,取出滅菌物品,將鍋內(nèi)剩余的水放掉。
另外,含糖培養(yǎng)基一般是控制在65.7kPa(112℃)的壓力,滅菌30min,以防高溫破壞培養(yǎng)基的成分。