在進(jìn)行比色和分光光度測定時(shí)，首先要利用顯色反應(yīng)將待測組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩镔|(zhì)，然后再進(jìn)行測定。因此，選擇合適的顯色反應(yīng)和嚴(yán)格控制反應(yīng)條件非常重要。

　　1、顯色反應(yīng)的選擇     顯色反應(yīng)分兩大類，一類是配合反應(yīng)，另一類是氧化還原反應(yīng)。其中配合反應(yīng)是主要的。測定中，待測組分能與多種顯色劑進(jìn)行不同的顯色反應(yīng)生成不同的有色物質(zhì)，選擇顯色劑和顯色反應(yīng)應(yīng)滿足如下要求：

　　（1）、靈敏度高。

　　（2）、選擇性好。選擇干擾較少或易于除去干擾的反應(yīng)。

　?。?）、反應(yīng)生成的有色化合物組成穩(wěn)定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

　?。?）、顯色劑在測定波長處無明顯吸收。

　　顯色劑分無機(jī)顯色劑和有機(jī)顯色劑。一般無機(jī)顯色劑與待測物質(zhì)的顯色反應(yīng)，很難滿足以上條件，因而除硫氰酸鹽、鉬酸銨及過氧化氫少數(shù)幾種外，目前應(yīng)用的不多。有機(jī)顯色劑以配合劑為多，顯色反應(yīng)多為配合反應(yīng)。反應(yīng)的選擇性和靈敏度都較無機(jī)顯色反應(yīng)高，因而它廣泛應(yīng)用于吸光光度法中。正是由于有機(jī)顯色劑的研制和應(yīng)用，推動(dòng)了吸光光度法的應(yīng)用和發(fā)展。有機(jī)顯色劑的種類繁多，常用的如雙硫腙、鄰二氮雜菲、丁二酮肟、二乙氨基二硫代甲酸鹽等。
　　
       2、測定條件的選擇

　　為了使比色及分光光度法有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，應(yīng)注意適當(dāng)?shù)墓舛葴y量條件，主要應(yīng)考慮一下幾點(diǎn)：

　?。?）、入射光波長的選擇 如前所述，為了使測定結(jié)果有較高的靈敏度，一般情況下，入射光波長應(yīng)選擇待測溶液有最大吸收的波長。但是，當(dāng)有干擾物質(zhì)存在時(shí)，若干擾物質(zhì)在該波長處有強(qiáng)烈的吸收，則必須另一靈敏度稍低但能消除干擾的波長作為入射光。

　?。?）、控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶?從儀器測量誤差考慮，為了使測定結(jié)果有較高的準(zhǔn)確度，一般應(yīng)控制吸光度0.2-0.7，為此應(yīng)控制標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液的濃度，并選擇適當(dāng)厚度的比色皿。

　　（3）、選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤?參比溶液也稱為空白溶液。在光度測量中，除利用參比溶液調(diào)節(jié)儀器的零點(diǎn)以為，還可消除比色皿器壁及溶劑對(duì)入射光的反射和吸收帶來的誤差。因此參比溶液的作用是非常重要的。

　　參比溶液的選擇應(yīng)按不同情況分別對(duì)待。當(dāng)試液及顯色劑均無色時(shí)，可用蒸餾水作為參比液;如果顯色劑無色，而被測試液中存在其他有色離子，可采用不加顯色劑的被測試液作為參比液;如果顯色劑和試液均有顏色，可在一份試液中加入適量的掩蔽劑，將被測組分掩蔽起來，使之不再與顯色劑作用。顯色劑與其他試劑均按試液測定方法加入，以此作為參比液，這樣可以消除顯色劑及一些共存離子的干擾?？傊x擇參比液的原則是，使試液的吸光度真正反映待測物質(zhì)的濃度。