在進行比色和分光光度測定時，首先要利用顯色反應將待測組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩镔|(zhì)，然后再進行測定。因此，選擇合適的顯色反應和嚴格控制反應條件非常重要。

　　1、顯色反應的選擇     顯色反應分兩大類，一類是配合反應，另一類是氧化還原反應。其中配合反應是主要的。測定中，待測組分能與多種顯色劑進行不同的顯色反應生成不同的有色物質(zhì)，選擇顯色劑和顯色反應應滿足如下要求：

　?。?）、靈敏度高。

　?。?）、選擇性好。選擇干擾較少或易于除去干擾的反應。

　?。?）、反應生成的有色化合物組成穩(wěn)定，化學性質(zhì)穩(wěn)定。

　?。?）、顯色劑在測定波長處無明顯吸收。

　　顯色劑分無機顯色劑和有機顯色劑。一般無機顯色劑與待測物質(zhì)的顯色反應，很難滿足以上條件，因而除硫氰酸鹽、鉬酸銨及過氧化氫少數(shù)幾種外，目前應用的不多。有機顯色劑以配合劑為多，顯色反應多為配合反應。反應的選擇性和靈敏度都較無機顯色反應高，因而它廣泛應用于吸光光度法中。正是由于有機顯色劑的研制和應用，推動了吸光光度法的應用和發(fā)展。有機顯色劑的種類繁多，常用的如雙硫腙、鄰二氮雜菲、丁二酮肟、二乙氨基二硫代甲酸鹽等。
　　
       2、測定條件的選擇

　　為了使比色及分光光度法有較高的靈敏度和準確度，應注意適當?shù)墓舛葴y量條件，主要應考慮一下幾點：

　?。?）、入射光波長的選擇 如前所述，為了使測定結(jié)果有較高的靈敏度，一般情況下，入射光波長應選擇待測溶液有最大吸收的波長。但是，當有干擾物質(zhì)存在時，若干擾物質(zhì)在該波長處有強烈的吸收，則必須另一靈敏度稍低但能消除干擾的波長作為入射光。

　?。?）、控制適當?shù)奈舛确秶?從儀器測量誤差考慮，為了使測定結(jié)果有較高的準確度，一般應控制吸光度0.2-0.7，為此應控制標準溶液和待測溶液的濃度，并選擇適當厚度的比色皿。

　?。?）、選擇適當?shù)膮⒈热芤?參比溶液也稱為空白溶液。在光度測量中，除利用參比溶液調(diào)節(jié)儀器的零點以為，還可消除比色皿器壁及溶劑對入射光的反射和吸收帶來的誤差。因此參比溶液的作用是非常重要的。

　　參比溶液的選擇應按不同情況分別對待。當試液及顯色劑均無色時，可用蒸餾水作為參比液;如果顯色劑無色，而被測試液中存在其他有色離子，可采用不加顯色劑的被測試液作為參比液;如果顯色劑和試液均有顏色，可在一份試液中加入適量的掩蔽劑，將被測組分掩蔽起來，使之不再與顯色劑作用。顯色劑與其他試劑均按試液測定方法加入，以此作為參比液，這樣可以消除顯色劑及一些共存離子的干擾。總之，選擇參比液的原則是，使試液的吸光度真正反映待測物質(zhì)的濃度。